你在進(jìn)行液相色譜分析時(shí)，首先要做好的事情就是配置好流動(dòng)相，流動(dòng)相的配制也不見得那么簡(jiǎn)單。在進(jìn)行液相色譜分析時(shí)流動(dòng)相需具備哪些特點(diǎn)？液相色譜法要如何配制流動(dòng)相。

 首先，了解液相色譜中流動(dòng)相需具備哪些特點(diǎn)。

      液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

 a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。

 b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)

 c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長(zhǎng)泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。

 d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。

 e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。

 f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

流動(dòng)相調(diào)制方法不同，對(duì)分析結(jié)果會(huì)產(chǎn)生顯著影響！

       液相色譜法中的流動(dòng)相主要用水性溶劑、有機(jī)溶劑或它們的混合液，但是如何配制？別不重視！因?yàn)椋x擇配制的方法不同，分析結(jié)果，特別是保留時(shí)間，是會(huì)有顯著差別的!

       溶劑：液相色譜法中的流動(dòng)相主要用水性溶劑、有機(jī)溶劑或它們的混合液，水性溶劑也常用于緩沖液。常因資料上表示的內(nèi)容和實(shí)際的配制方法不同，而產(chǎn)生流動(dòng)相的差異，影響了色譜圖和分析結(jié)果。一般來(lái)說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進(jìn)行。溶液的體積因溫度而變化，所以按重量比混合可調(diào)制再現(xiàn)性較好的混合溶劑，但由于操作較麻煩，通常多用體積比混合。只要沒有特別標(biāo)明，就可按體積比進(jìn)行混合，但在特殊情況下，如，胺類粘度高的溶液混合時(shí)，有時(shí)用重量—體積比（W/V）的方法。

一、有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合方法 

      有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合液作為流動(dòng)相是經(jīng)常的，但由于混合方法不同，有時(shí)分析結(jié)果相差很大。如20mM磷酸鈉緩沖液（pH2.5）90%與乙腈10%的混合液，混合比為9∶1時(shí)，20mM 磷酸鈉緩沖液（pH2.5）90%與乙腈10%的體積比為9∶1，也就是可以解釋為各自按體積比例的相當(dāng)量稱取后進(jìn)行混合。另外，按10%乙腈解釋，用20mM 磷酸鈉緩沖液（pH2.5），將乙腈稀釋調(diào)制也可以成立。在后者情況下，產(chǎn)生混合體積減少部分，余下的添加20mM 磷酸鈉緩沖液。兩者雖然沒有太大的差別，但由于混合方式不同，分析結(jié)果，特別是保留時(shí)間，也會(huì)有顯著的差別，這點(diǎn)必須注意。

二、50%或（V/V＝1/1）乙腈水溶液的配制方法

       對(duì)于用V/V＝1/1的表示配制乙腈水溶液，多按這種方法進(jìn)行：用量筒測(cè)定乙腈500mL，用另一量筒測(cè)定水500mL，兩種液體在瓶?jī)?nèi)充分搖晃混合。不過 50%乙腈水溶液的表示時(shí)，同樣也多是按上述方法配制，但查化學(xué)辭典時(shí)，實(shí)際上是按這種方法進(jìn)行配制：首先將500mL乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶邊攪拌邊加水，等待液溫達(dá)到室溫，用全量水，使溶液到1L。這樣一來(lái)，用%表示和“V/V”體積比表示，zui終得出的流動(dòng)相組成不同。也就是說，混合溶劑的密度，與由原溶劑密度計(jì)算的單純平均值不相同，所以用上述兩種方法調(diào)制的流動(dòng)相組成差異。如在室溫（25℃）附近水50mL和乙腈50mL混合時(shí)體積不是100mL，而有所減少，約為96mL。在一般情況下，多用操作簡(jiǎn)便的*種方法。

三、溶劑體積的溫度影響

       如前所述，溶液的密度受周圍溫度的影響。剛從溶劑冷藏箱拿出來(lái)的溶液溫度與實(shí)驗(yàn)室的室溫相比，要低不少，乙腈和水混合液因發(fā)熱反應(yīng)，溶液溫度升高。因此，為能調(diào)制再現(xiàn)性好的流動(dòng)相，建議在使用前用水?。ɑ驘崴。⒁簻卣{(diào)到接近室溫。

 四、用兩臺(tái)泵進(jìn)行溶劑混合

       在反相分析中，常用的有機(jī)溶劑和水的等濃度法，使用高壓兩元梯度系統(tǒng)，用兩臺(tái)泵將流動(dòng)相分別輸液后混合等封閉式混合時(shí)與預(yù)先在瓶?jī)?nèi)混合后用1臺(tái)泵輸液時(shí)，因混合后體積變化的不同，保留時(shí)間也有所不同，一定要注意。不僅是流動(dòng)性的調(diào)制方法，試樣溶液和其他溶液的調(diào)制也經(jīng)常有上述問題，另外，在不同部門（醫(yī)藥部門或化工部門）各自都有自己的常識(shí)和習(xí)慣。在這種情況下，就要求各部門在制作相關(guān)溶液配制方法時(shí)能規(guī)定通則，定義設(shè)計(jì)溶液的調(diào)制方法，這樣避免混亂，以在日常工作中更好地記住這些表示方法。